第一节《 人类的生殖控制》(素材)word教案 中图版生物选修2
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增大字体 2.4 取卵 我院用B超引导经阴道穿刺取卵术取卵。此法不需麻醉切口，也不经过膀胱，避免了尿液对精子的伤害，优于用腹腔镜或B超引导经腹取卵的方法。[来源:学科网][来源:学科网ZXXK]
2.5 体外授精 将取到的卵泡液注入培养皿，肉眼快速辨认含卵细胞及其外周的透明带、放射冠的卵冠丘复合物。在解剖镜下确认有卵细胞存在后，置入CO 2 培养箱培养4～8h，再根据复合物的形态变化判断选择成熟卵细胞，按每卵配10～20万个精子的比例，投入经过洗涤优选已诱导获能的精子，授精后16～18h观察情况，将受精卵移入培养试管/皿内培养。
2.6 胚胎移植 于取卵后48h，胚胎发育成2～8个细胞阶段或在取卵后72h胚胎发育至8～16个细胞时植入子宫。后者较符合自然受精胚胎进入子宫的时间，且在传统体外培养条件下，只有最健康的胚胎才能活到3天，故移植成功率高。有报道，应用共培养术，可使胚胎培养至囊胚期再移植，妊娠率高达50% ［4］ 。一次移植的胚胎数以2～3枚为宜。因为增加胚胎移植数，妊娠率虽呈不按比例的增加，但多胎率也会随之增加，经对几组移植1～6胎资料的比较 ［5］ ，其中以移植3个胚胎的妊娠率相对较高，而多胎率相对较低。
2.7 胚胎冻融 不仅AID治疗的精子需要冻融，在IVF-ET中由于促超排卵的应用，一次周期回收的卵泡，经受精发育的胚胎，移植后会有剩余也需要冷冻储存，如移植失败，就可在下个自然周期或HRT周期移植，以提高一次取卵的妊娠率。另外遇到患者因促超排卵引发的卵巢刺激综合征，为了防止妊娠加重病情，也可将胚胎冻存，留待以后移植用。胚胎冻存的机制是，超低温可抑制细胞的新陈代谢，使生命进入休眠状态而保存下来。保存温度为 -196℃，保存装置为以液氮作致冷源的液氮罐，但在胚胎的冷冻和升温复苏过程中，当经过0℃～60℃这一温区时，如降温过快，细胞内液中的水分又会很快结冰，因为体积膨胀而涨破细胞膜，造成细胞死亡;如降温过慢，细胞外液中的水分会先结成细小冰晶，使外液的渗透压升高，导致细胞内液中的水分向外渗透，溶质浓度相对升高，从而引起细胞蛋白质的分解变性 ，细胞一样难逃死亡厄运。因此在胚胎的冻融中，必须选择合适的降温与升温速度，并借助于某些具有既能减少细胞内的冰晶形成，又能延缓细胞外液中溶质浓度升高的冷冻保护剂的作用，才能使胚胎安全地实现冻存或复苏。目前常采用的方法是慢速冻快速复温法。精子冻藏的机制和冻融的原理一如上述。
2.8 胚胎移植后监测 移植后14天验晨尿HCG阳性为生化妊娠，显示胚胎植入和发育正常。移植4～6周腹部B超查到胎囊、胚胎和心管搏动为临床妊娠。
2.9 胚胎移植合并症 主要有流产、宫外孕、多胎妊娠、卵巢过度刺激综 合征（OHSS）。
2.10 妊娠率 目前为25%～35%。随着对影响妊娠成功因素的深入研究和相应技术环节的改进，预期IVF-ET妊娠率还会提高。[来源:学科网]
3 卵泡浆内单精子显微注射（ICSI） 这一技术是在针对男性精子数量不足，功能异常导致受精障碍所采取的体外受精的微滴法、透明带部分切除法及透明带下授精等方法基础上发展起来的。1992年Palerme等报道了用该技术授精的首例试管婴儿诞生。该技术又称第二代试管婴儿，其操作方法是，不用进行精子的诱导获能处理，只须选择一个形态正常，缓慢运动的精子先予以制动。方法用注射针挤压精子尾部，稍微擦破细胞质膜，诱导精子从擦破点释放精子细胞质体因子激活卵细胞，卵细胞的激活对ICSI的正常受精至关重要，接着按尾先头后的顺序吸精子放入注射针，再通过显微操作，将精子注入卵胞浆内，即完成受精。其他技术环节同于常规IVF-ET。对 精道不通的患者可进行附睾穿刺，如吸出物中无精子，则从睾丸取活组织分离精子，或取精细胞激活后使用。适应证为:严重少、弱畸精症、输精管阻塞、先天性双侧输精管缺如以及输精管结扎后子女伤亡，吻合输精管失败或无法吻合者。ICSI是治疗男性不育的有效方法，但目前研究揭示，严重少、弱精症是由染色体镶嵌型异常引起，先天性双侧输精管缺如则常与囊性纤维膜传导基因突变有关，两者都是遗传病，对这两种患者治疗前应告知遗传风险，妊娠后需进行详细产前诊断，有异常须终止妊娠，或在胚胎移植前进行遗传学诊断（PGD），筛选优质胚胎移植。
4 胚胎植入前遗传学诊断（PGD） 此法也称第三代试管婴儿，指在IVF-ET的胚胎移植前，取胚胎的遗传物质进行分析，诊断是否有异常，筛选健康胚胎移植，防止遗传病传递的方法。检测物质取4～8个细胞期胚胎的1个细胞或受精前后的卵第一、二极体。取样不影响胚胎发育。检测用单细胞DNA分析法，一是聚合酶链反应（PCR），检测男女性别和单基因遗传病;另一种是荧光原位杂交（FISH），检测性别和染色体病。早在1964年Edwards就提出了PGD的思想。1989年Handyside AH首先将PGD成功应用于临床，用PCR技术行Y染色体特异基因体外扩增，将诊断为女性的胚胎移植入子宫获妊娠成功。开初的PGD都是用PCR或FISH检测性别，选女性胚胎移植，帮助有风险生育血友病A、进行性肌营养不良等X连锁遗传病后代的夫妇妊娠分娩出一正常女婴。但按遗传规律，此法无疑否定健康男孩的出生，而允许携带者女孩繁衍，并不能切断致病基因的传递。1992年，美国首先报道用PCR检测囊性纤维成功，并通过胚胎筛选，诞生了健康婴儿。之后，α-1-抗胰岛素缺乏症、家庭黑性痴呆、色素沉着视网膜炎等多种单基因遗传病的PGD检测方法建立，PGD进入对单基因遗传病的检测预防阶级。1993年以后，由于晚婚晚育使大龄产妇人数增多，而45岁以上的妇女染色体异常率高、自然妊娠容易分娩18-3体和21-3体愚型儿，于是PGD的工作热点转向了对染色体病的检测预防，检测用FISH。由于取样多用第一极体，筛选出的为未授精卵，须进行单精子胞浆内注射，待培养发育成 胚胎后移植。据统计，中途停止发育的胚胎，其染色体异常率达70%，所以选择染色体正常的胚胎移植，还能提高IVF-ET的成功率。从理论上讲，凡能诊断的遗传病，应该都能通过PGD防止其传递，但限于目前的技术条件，PGD的适应证还有一定的局限。优生是世界共同关注的问题，随着分子生物技术的发展和更多遗传病基因被确定，相信一些准确、安全的遗传诊断技术会不断出现，PGD技术会日趋完善，更好的造福人类。
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2.5 体外授精 将取到的卵泡液注入培养皿，肉眼快速辨认含卵细胞及其外周的透明带、放射冠的卵冠丘复合物。在解剖镜下确认有卵细胞存在后，置入CO 2 培养箱培养4～8h，再根据复合物的形态变化判断选择成熟卵细胞，按每卵配10～20万个精子的比例，投入经过洗涤优选已诱导获能的精子，授精后16～18h观察情况，将受精卵移入培养试管/皿内培养。
2.6 胚胎移植 于取卵后48h，胚胎发育成2～8个细胞阶段或在取卵后72h胚胎发育至8～16个细胞时植入子宫。后者较符合自然受精胚胎进入子宫的时间，且在传统体外培养条件下，只有最健康的胚胎才能活到3天，故移植成功率高。有报道，应用共培养术，可使胚胎培养至囊胚期再移植，妊娠率高达50% ［4］ 。一次移植的胚胎数以2～3枚为宜。因为增加胚胎移植数，妊娠率虽呈不按比例的增加，但多胎率也会随之增加，经对几组移植1～6胎资料的比较 ［5］ ，其中以移植3个胚胎的妊娠率相对较高，而多胎率相对较低。
2.7 胚胎冻融 不仅AID治疗的精子需要冻融，在IVF-ET中由于促超排卵的应用，一次周期回收的卵泡，经受精发育的胚胎，移植后会有剩余也需要冷冻储存，如移植失败，就可在下个自然周期或HRT周期移植，以提高一次取卵的妊娠率。另外遇到患者因促超排卵引发的卵巢刺激综合征，为了防止妊娠加重病情，也可将胚胎冻存，留待以后移植用。胚胎冻存的机制是，超低温可抑制细胞的新陈代谢，使生命进入休眠状态而保存下来。保存温度为 -196℃，保存装置为以液氮作致冷源的液氮罐，但在胚胎的冷冻和升温复苏过程中，当经过0℃～60℃这一温区时，如降温过快，细胞内液中的水分又会很快结冰，因为体积膨胀而涨破细胞膜，造成细胞死亡;如降温过慢，细胞外液中的水分会先结成细小冰晶，使外液的渗透压升高，导致细胞内液中的水分向外渗透，溶质浓度相对升高，从而引起细胞蛋白质的分解变性 ，细胞一样难逃死亡厄运。因此在胚胎的冻融中，必须选择合适的降温与升温速度，并借助于某些具有既能减少细胞内的冰晶形成，又能延缓细胞外液中溶质浓度升高的冷冻保护剂的作用，才能使胚胎安全地实现冻存或复苏。目前常采用的方法是慢速冻快速复温法。精子冻藏的机制和冻融的原理一如上述。
2.8 胚胎移植后监测 移植后14天验晨尿HCG阳性为生化妊娠，显示胚胎植入和发育正常。移植4～6周腹部B超查到胎囊、胚胎和心管搏动为临床妊娠。
2.9 胚胎移植合并症 主要有流产、宫外孕、多胎妊娠、卵巢过度刺激综 合征（OHSS）。
2.10 妊娠率 目前为25%～35%。随着对影响妊娠成功因素的深入研究和相应技术环节的改进，预期IVF-ET妊娠率还会提高。[来源:学科网]
3 卵泡浆内单精子显微注射（ICSI） 这一技术是在针对男性精子数量不足，功能异常导致受精障碍所采取的体外受精的微滴法、透明带部分切除法及透明带下授精等方法基础上发展起来的。1992年Palerme等报道了用该技术授精的首例试管婴儿诞生。该技术又称第二代试管婴儿，其操作方法是，不用进行精子的诱导获能处理，只须选择一个形态正常，缓慢运动的精子先予以制动。方法用注射针挤压精子尾部，稍微擦破细胞质膜，诱导精子从擦破点释放精子细胞质体因子激活卵细胞，卵细胞的激活对ICSI的正常受精至关重要，接着按尾先头后的顺序吸精子放入注射针，再通过显微操作，将精子注入卵胞浆内，即完成受精。其他技术环节同于常规IVF-ET。对 精道不通的患者可进行附睾穿刺，如吸出物中无精子，则从睾丸取活组织分离精子，或取精细胞激活后使用。适应证为:严重少、弱畸精症、输精管阻塞、先天性双侧输精管缺如以及输精管结扎后子女伤亡，吻合输精管失败或无法吻合者。ICSI是治疗男性不育的有效方法，但目前研究揭示，严重少、弱精症是由染色体镶嵌型异常引起，先天性双侧输精管缺如则常与囊性纤维膜传导基因突变有关，两者都是遗传病，对这两种患者治疗前应告知遗传风险，妊娠后需进行详细产前诊断，有异常须终止妊娠，或在胚胎移植前进行遗传学诊断（PGD），筛选优质胚胎移植。
4 胚胎植入前遗传学诊断（PGD） 此法也称第三代试管婴儿，指在IVF-ET的胚胎移植前，取胚胎的遗传物质进行分析，诊断是否有异常，筛选健康胚胎移植，防止遗传病传递的方法。检测物质取4～8个细胞期胚胎的1个细胞或受精前后的卵第一、二极体。取样不影响胚胎发育。检测用单细胞DNA分析法，一是聚合酶链反应（PCR），检测男女性别和单基因遗传病;另一种是荧光原位杂交（FISH），检测性别和染色体病。早在1964年Edwards就提出了PGD的思想。1989年Handyside AH首先将PGD成功应用于临床，用PCR技术行Y染色体特异基因体外扩增，将诊断为女性的胚胎移植入子宫获妊娠成功。开初的PGD都是用PCR或FISH检测性别，选女性胚胎移植，帮助有风险生育血友病A、进行性肌营养不良等X连锁遗传病后代的夫妇妊娠分娩出一正常女婴。但按遗传规律，此法无疑否定健康男孩的出生，而允许携带者女孩繁衍，并不能切断致病基因的传递。1992年，美国首先报道用PCR检测囊性纤维成功，并通过胚胎筛选，诞生了健康婴儿。之后，α-1-抗胰岛素缺乏症、家庭黑性痴呆、色素沉着视网膜炎等多种单基因遗传病的PGD检测方法建立，PGD进入对单基因遗传病的检测预防阶级。1993年以后，由于晚婚晚育使大龄产妇人数增多，而45岁以上的妇女染色体异常率高、自然妊娠容易分娩18-3体和21-3体愚型儿，于是PGD的工作热点转向了对染色体病的检测预防，检测用FISH。由于取样多用第一极体，筛选出的为未授精卵，须进行单精子胞浆内注射，待培养发育成 胚胎后移植。据统计，中途停止发育的胚胎，其染色体异常率达70%，所以选择染色体正常的胚胎移植，还能提高IVF-ET的成功率。从理论上讲，凡能诊断的遗传病，应该都能通过PGD防止其传递，但限于目前的技术条件，PGD的适应证还有一定的局限。优生是世界共同关注的问题，随着分子生物技术的发展和更多遗传病基因被确定，相信一些准确、安全的遗传诊断技术会不断出现，PGD技术会日趋完善，更好的造福人类。
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