第二节《 DNA片段的扩增——PCR技术 》word学案 中图版生物选修1

第二节 DNA片段的扩增——PCR技术
[课标要求]
1．理解PCR的原理，讨论PCR应用。
2．尝试PCR技术的基本操作。
[ 知识梳理]
一．背景知识
1． 细胞内DNA复制步骤：
（1）在            作用下解开DNA双链
(2 ) 在            作用下，以DNA单链为模板，合成一段            ;（两条DNA模板链各需一个RNA引物）
(3 ) 以RNA引物为起点，在          作用下，以           为原料，按照碱基互补配对原则合成两条新链。
2． 聚合酶链式反应(PCR) 概念;                                                     
                                                                                。
3． PCR过程与细胞内DNA复制过程区别：
（1）引物是人工合成的        单链，２０－３０个脱氧核苷酸，而不是RNA。
(2)  解旋通过对反应        的控制来实现而不依靠              。[来源:学科网ZXXK][来源:Z#xx#k.Com]
4．PCR 过程：
(1) 将PCR缓冲液 、          、一对引物、四种          、DNA聚合酶、Mg2 +等成分加入到特制的微量离心管中。
(2) 高温变性：                                                          
                                                                         。
(3) 低温复性：                                                           [来源:Z+xx+k.Com]
                                                                        。
(4) 中温延伸：                                                           [来源:学科网ZXXK]
                                                                        。
二． 实践案例
1．PCR实验虽然原理复杂，但操作十分简单，因为生物制剂公司已把PCR缓冲液、DNA聚合酶、脱氧核苷酸贮备液等组分配成了PCR试剂盒，实验人员仅需加入模板DNA及引物即可，所以快速、高效、灵活和易于操作是PCR技术的突出优点。
2．材料用具 略
3．活动程序
(1) 加入各种试剂，混合，离心10s，放入PCR仪中。
 (2) 扩增循环， 在PCR仪上设置好PCR热循环程序：
循环数 高温变性 低温复性 中温延伸
第一次 95℃,5min 55℃,1min 72℃,1min
30次 95℃,30s 55℃,30s 72℃,1min
最后一次 ¬¬   —— ——[来源:学*科*网Z*X*X*K] 72℃,7min
注：反应产物在4℃保存
4．检测扩增效果
（1）稀释样品10倍
（2）以H2O作对照，在波长 260nm处，将紫外分光光度计读数调到零。
（3）加入到厚度为1cm的比色杯中，测定260nm处的光吸收值
（4）DNA浓度（μg/mL）=（A 260nm/0.02）×稀释倍数
三．探究活动
 PCR实验虽然操作简单，但实验设备及药品价格较高，可以 利用自己准备的简易材料，设计并进行PCR技术的模拟实验操作。

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